Các vấn đề niêm phong và ô nhiễm trong các tấm nuôi cấy tế bào đa địa điểm

Đang tải và xử lý các tấm nuôi cấy tế bào đa giếng:

Tấm nuôi cấy tế bào cũng tuân theo nguyên tắc vô trùng nghiêm ngặt khi thực hiện các hoạt động tế bào. Tất cả các hoạt động phải được tiêu chuẩn hóa và khoa học, và sẽ không gây ra tác động bổ sung đến sự phát triển của tế bào. Vấn đề phổ biến nhất là làm thế nào để đảm bảo tính đồng nhất của các tế bào sau khi thêm mẫu và giảm thiểu tác động của việc thay đổi môi trường đến trạng thái tăng trưởng của các tế bào.

hỏi:
Nắp của các đĩa nuôi cấy 96 và 24 giếng hoặc đĩa petri rất lỏng lẻo, thuận tiện cho việc thông gió, nhưng liệu vi khuẩn, nấm mốc và các chất ô nhiễm khác cũng bị trượt vào?

trả lời:
Nắp rất lỏng lẻo, thuộc về văn hóa bán mở, và mục đích của việc này là để thông gió (thực tế, đó là làm cho CO2 bên ngoài món ăn văn hóa Trao đổi hoàn toàn với món ăn nuôi cấy và duy trì giá trị pH của văn hóa trung bình).
Mọi thứ đều có ưu điểm và nhược điểm, tất nhiên làm tăng khả năng ô nhiễm. Ngoài ra, điều này làm cho chất lỏng trong đĩa bay hơi, điều đáng chú ý đối với liều thuốc chính xác. Do đó, hai biện pháp sau đây là cần thiết: a. Không khí trong lò ấp phải sạch sẽ (ánh sáng cực tím thông thường, chà cồn và ươm tạo nên được mở và đóng càng ít càng tốt) b. Độ ẩm trong vườn ươm phải luôn được giữ ở mức 100% (bồn rửa với nước cất vô trùng được đặt trong vườn ươm).
Giống như một đĩa petri, nó cũng là một thùng chứa có nắp lộn ngược, và nó sẽ không bị ô nhiễm. Chủ yếu là do áp suất âm của luồng không khí được tạo ra bởi cạnh "L" của nắp, có các vi sinh vật được gắn vào bụi và bụi do luồng không khí mang theo không thể đi qua cạnh của vỏ tạo ra áp suất âm. Hiệu ứng thông gió chỉ thông qua sự khuếch tán của không khí và không có luồng khí nào được tạo ra, do đó nó sẽ chỉ thở và không xâm nhập vào vi khuẩn.

hỏi:
Sử dụng một tấm 24 giếng, có các hoạt động trong một số giếng (trong băng ghế siêu sạch), và có các tế bào được nuôi cấy trong các giếng khác. Tôi lo lắng rằng điều này sẽ gây ô nhiễm. Tôi không biết phải chú ý đến điều gì?

trả lời:
Nếu hoạt động được tiêu chuẩn hóa trong băng ghế siêu sạch, nó sẽ ổn. Tôi nghĩ rằng bạn có thể sử dụng đầy đủ bìa của tấm văn hóa, cố gắng chỉ phơi bày các lỗ hổng được vận hành và che các lỗ khác bằng vỏ.
Xem xét toàn diện trước khi sử dụng và sử dụng đầy đủ tất cả các lỗ; Nếu bạn chỉ cần sử dụng một vài lỗ, bạn chỉ có thể sử dụng một bên và che phần còn lại bằng nắp. Tôi đã quen với việc sử dụng lỗ bên phải trước (thuận tiện để thêm các mẫu vào tay phải).

Khi vận hành, sử dụng một vài slide thủy tinh để nâng một bên của bảng, không mở nắp hoàn toàn, thường không có vấn đề gì.
Phân phối và giải pháp tế bào không đồng đều

hỏi:
Các tế bào được cấy vào tấm nuôi cấy, và các tế bào luôn tập hợp ở phần ngoại vi, làm thế nào để đối phó với nó?

trả lời:
Tôi có thể hỏi làm thế nào các tế bào của bạn được trộn lẫn? Có phải là đường ống hoặc lắc tấm nuôi cấy? Nếu nó là cái sau, và nếu nó bị lắc trong một vòng tròn, rất có khả năng các tế bào sẽ được ném vào phần ngoại vi do lực ly tâm, dẫn đến ít tế bào ở giữa. Hơn bốn tuần!
Đây là một cách tốt: trước khi trồng tấm hạt, hãy đặt tấm nuôi cấy vào máy ấp trong vài giờ bão hòa và sau đó lấy nó ra. Lực phải là ánh sáng khi trồng các tế bào. Thêm từ từ cho phép huyền phù tế bào chảy vào các giếng của tấm, và các tế bào được nuôi cấy về cơ bản phát triển đều. Hãy nhớ không bao giờ lắc với một máy lắc, hoặc các tế bào của bạn sẽ tụ tập lại với nhau như bạn đã nói.
Đường kính lỗ của tấm nuôi cấy càng nhỏ, hiện tượng này càng rõ ràng. Hiện tượng này là không thể tránh khỏi đối với các tấm 24 và 96 giếng, bởi vì chất lỏng tuân thủ tường để dung dịch nuôi cấy trong giếng không tạo thành một mức chất lỏng, nhưng ngoại vi cao, giống như một tấm gương lõm. Tuy nhiên, khi sử dụng hai loại tấm lỗ này, không thể thêm đủ lượng dung dịch nuôi cấy do nhu cầu can thiệp bổ sung, do đó các tế bào sẽ xuất hiện "thu thập cạnh" cùng với giải pháp nuôi cấy. Nó phụ thuộc vào những chỉ số bạn cần quan sát. Nếu đó là MTT, hóa mô miễn dịch sẽ ảnh hưởng đến kết quả do phân lớp tế bào.
Khi tiêu hóa các tế bào, hãy chú ý đến việc chuyển ống đều để tránh các khối tế bào và lượng dung dịch nuôi cấy trong giếng là đủ. Nói chung, thêm dung dịch nuôi cấy đủ khi cấy và thay đổi giải pháp một lần khi thêm can thiệp. Lượng dung dịch nuôi cấy được thêm vào giải pháp can thiệp bằng với lượng dung dịch nuôi cấy tại thời điểm tiêm chủng, trong trường hợp này, hiện tượng "bộ cạnh" sẽ được cải thiện, vì vậy bạn cũng có thể thử.

hỏi:
Những gì tôi đã làm là thí nghiệm hình thành mảng bám. Tốt nhất là lan truyền các tế bào trong một lớp thống nhất. Hầu hết các lỗ đều ổn khi virus được tiêm, và một số trong số chúng không đồng nhất. Có sự khác biệt lớn trong nhóm tế bào. Tôi muốn hỏi bạn bạn sử dụng phương pháp nào khi thêm ô?

trả lời:
Điều quan trọng là pipet các tế bào thành một huyền phù tế bào đơn sau khi tiêu hóa! Hãy chắc chắn rằng số lượng tế bào trong mỗi giếng là nhất quán khi tách tấm!
Tất nhiên, cũng có các yếu tố xử lý. Sự song song giữa các giếng cũng rất quan trọng. Ví dụ, khi thêm thuốc, trộn thuốc sau khi pha loãng để đảm bảo rằng nồng độ của mỗi giếng là phù hợp!
Hơn nữa, khi thêm các tế bào và thuốc, nhóm thử nghiệm và nhóm đối chứng nên được thêm vào để tránh sự khác biệt về mật độ tế bào và nồng độ thuốc gây ra bởi trình tự thêm mẫu!

hỏi:
Thổi đã đồng đều, nhưng ván, 6 lỗ và 24 lỗ luôn không đồng đều, và một chút tập trung ở giữa. Hơn nữa, rõ ràng việc đếm được thực hiện, và sau một hoặc hai ngày, mật độ của mỗi lỗ là khác nhau, điều này sẽ ảnh hưởng đến việc phát hiện. Có cách nào tốt không?

trả lời:
Nếu bạn sử dụng một pipet pasteur, không hút quá nhiều mỗi lần, bởi vì các tế bào trong pipet sẽ tự động chìm, thường thì số lượng tế bào trong một vài lỗ đầu tiên là lớn và huyền phù tế bào thường đồng nhất và chất lỏng sẽ Đi theo con đường hình chữ S.
Nếu bạn sử dụng một pipet, các mẹo nên được xử lý và loại bỏ để tránh làm hỏng các tế bào, để mỗi lần chất lỏng được thực hiện tương ứng với một cái giếng. Nó là chính xác hơn để thêm lỗ một-một với đầu. Nhưng cũng chú ý đến việc trộn hệ thống treo.

Để thiết lập một nhóm song song, n phải đủ lớn (bạn có thể tính toán nó).

Không lắc sau khi mạ, vì lắc sẽ khiến các tế bào tổng hợp về phía trung tâm. Tốt nhất là plank một lần.

Tấm nuôi cấy tế bào xốp Yongyue Medical luôn coi kiểm soát chất lượng là cuộc sống của doanh nghiệp và theo đuổi việc cải thiện liên tục về khả năng cạnh tranh của doanh nghiệp. Công ty luôn tuân thủ tinh thần doanh nghiệp tuân thủ luật pháp và quy định, nghiêm khắc với kỷ luật tự giác, khoan dung và dám nhận trách nhiệm như là tiêu chuẩn trong hoạt động, duy trì và mở rộng thị trường với chất lượng tuyệt vời và dịch vụ tuyệt vời, và đáp ứng nhu cầu của khách hàng đến mức lớn nhất. . Win-win với khách hàng là mục tiêu phát triển của chúng tôi. Yongyue Medical! Đối tác đáng tin cậy của bạn. Chúng tôi sẵn sàng hợp tác chân thành với bạn để tạo ra một tương lai tốt đẹp hơn.